Aida Charfi

Zaburzenia ze spektrum neuromyelitis optica (NMOSD) są rzadką grupą zapalnych chor b demielinizacyjnych ośrodkowego ukladu nerwowego, kt rych etiopatogeneza obejmuje czynniki genetyczne. Związek między HLA a NMOSD byl badany w r żnych populacjach. Jednak żadne badanie asocjacyjne nie zostalo przeprowadzone w Tunezji. Dlatego przeprowadziliśmy badanie kliniczno-kontrolne obejmujące 12 pacjent w z NMOSD (rekrutowanych przez okres 11 lat) i 123 niespokrewnionych zdrowych os b z populacji poludniowej Tunezji. Typowanie HLA klasy I przeprowadzono przy użyciu techniki limfocytotoksyczności zależnej od dopelniacza. Typowanie HLA klasy II przeprowadzono metodą PCR-SSP. Polimorfizm marker w HLA u naszych pacjent w zostal statystycznie por wnany z grupą kontrolną. W przypadku regionu HLA klasy I nasza praca sugeruje wcześniej nieopisany związek dw ch marker w z NMOSD: HLA-A23 i HLA-B7. W przypadku regionu HLA klasy II nie stwierdzono związku, w przeciwieństwie do badań przeprowadzonych w innych populacjach. Nasze wyniki sugerują potrzebę wsp lpracy wieloośrodkowej w celu zwiększenia wielkości pr by i potwierdzenia zaobserwowanych powiązań HLA.

I disturbi dello spettro della neuromielite optica (NMOSD) sono un gruppo raro di malattie infiammatorie demielinizzanti del sistema nervoso centrale la cui eziopatogenesi coinvolge fattori genetici. L'associazione tra HLA e NMOSD stata studiata in diverse popolazioni. Tuttavia, nessuno studio di associazione stato condotto in Tunisia. Abbiamo quindi condotto uno studio caso-controllo includendo 12 pazienti affetti da NMOSD (reclutati in un periodo di 11 anni) e 123 soggetti sani non imparentati della popolazione della Tunisia meridionale. La tipizzazione HLA di classe I stata eseguita con la tecnica della linfocitotossicit complemento-dipendente. La tipizzazione HLA di classe II stata eseguita mediante PCR-SSP. Il polimorfismo dei marcatori HLA nei nostri pazienti stato confrontato statisticamente con il gruppo di controllo. Per quanto riguarda la regione HLA di classe I, il nostro lavoro suggerisce l'associazione non descritta in precedenza di due marcatori con la NMOSD: HLA-A23 e HLA-B7. Per quanto riguarda la regione HLA di classe II, non stata trovata alcuna associazione, contrariamente agli studi condotti in altre popolazioni. I nostri risultati suggeriscono la necessit di una collaborazione multicentrica per espandere la dimensione del nostro campione e convalidare le associazioni HLA osservate.

Les d sordres du spectre de la neuromy lite optique (NMOSD) correspondent un groupe rare de maladies inflammatoires d my linisantes du syst me nerveux central dont l' tiopathog nie implique des facteurs g n tiques. L'association HLA et NMOSD a t tudi e dans diff rentes populations. Cependant, aucune tude d'association n'a t men e en Tunisie. Nous avons donc men une tude cas-t moins incluant 12 patients NMOSD (recrut s sur une p riode de 11 ans) et 123 sujets sains non apparent s de la population Sud-Tunisienne. Le typage HLA classe I a t r alis par technique de lymphocytotoxicit compl ment d pendante. Le typage HLA classe II a t r alis par PCR-SSP. Le polymorphisme des marqueurs HLA chez nos patients a t compar statistiquement au groupe t moin. Pour la r gion HLA classe I, notre travail sugg re l'association, non d crite auparavant, de deux marqueurs avec les NMOSD: HLA-A23 et HLA-B7. Concernant la r gion HLA classe II, aucune association n'a t trouv e contrairement des tudes men es dans d'autres populations. Nos r sultats incitent une collaboration multicentrique afin d' largir l'effectif de notre chantillon et valider les associations HLA observ es.

In the course of this work, we were interested in the development and technical validation of XM by CMF, which enabled us to deduce the following conclusions: Concerning the choice of TN, we found that NHP is the best control that can be used. The choice of negative sera in this pool was not based on the criteria of male sex and AB blood group. We plan to take these into account when building a new NHP. For PT, we compared the results provided by a positive serum and a pool of strongly positive sera. In the pure forms of the sera tested, a prozone effect was observed. This is due to the high concentration of anti-HLA Ac, which means that caution should be exercised when using this type of serum as a PT. However, the results were comparable for the poly-specific positive serum diluted at 1/10 and the pool of positive sera diluted at 1/2. We opted for the use of a pool of positive sera for its wider coverage of HLA antigenic specificities

Nel corso di questo lavoro, ci siamo interessati allo sviluppo e alla convalida tecnica dell'XM da parte del CMF, che ci ha permesso di trarre le seguenti conclusioni: per quanto riguarda la scelta dell'NT, abbiamo riscontrato che l'NHP il miglior controllo che pu essere utilizzato. La scelta dei sieri negativi in questo pool non si basata sui criteri del sesso maschile e del gruppo sanguigno AB. Pensiamo di tenerne conto al momento della creazione di una nuova NHP. Per il PT, abbiamo confrontato i risultati forniti da un siero positivo e da un pool di sieri fortemente positivi. Nelle forme pure dei sieri testati stato notato un effetto prozona. Ci dovuto all'elevata concentrazione di Ac anti-HLA, il che significa che occorre usare cautela quando si utilizza questo tipo di siero come PT. Tuttavia, i risultati sono stati paragonabili per il siero polispecifico positivo diluito 1:10 e per il pool di sieri positivi diluiti 1:2. Abbiamo optato per l'utilizzo di un pool di sieri positivi diluiti 1:1. Abbiamo optato per l'utilizzo di un pool di sieri positivi a causa della pi ampia copertura delle specificit antigeniche HLA.

No decurso deste trabalho, interessou-nos o desenvolvimento e a valida o t cnica do XM pelo CMF, o que nos permitiu tirar as seguintes conclus es: Relativamente escolha do TN, verific mos que o PNC o melhor controlo que pode ser utilizado. A escolha dos soros negativos deste pool n o se baseou nos crit rios do sexo masculino e do grupo sangu neo AB. Tencionamos ter este facto em conta quando criarmos um novo PNC. Para o TP, compar mos os resultados fornecidos por um soro positivo e por um grupo de soros fortemente positivos. Nas formas puras dos soros testados, observou-se um efeito de prozona. Este facto deveu-se elevada concentra o de Ac anti-HLA, o que significa que se deve ter cuidado ao utilizar este tipo de soro como PT. No entanto, os resultados foram compar veis para o soro poli-espec fico positivo dilu do 1:10 e para o pool de soros positivos dilu dos 1:2. Opt mos por utilizar um pool de soros positivos devido sua maior cobertura de especificidades antig nicas HLA.

Im Laufe dieser Arbeit haben wir uns mit der Entwicklung und technischen Validierung des XM durch die CMF befasst, woraus wir die folgenden Schlussfolgerungen ableiten konnten: Bez glich der Wahl der TN fanden wir, dass die PSN die beste Kontrolle ist, die man verwenden kann. Die Auswahl der negativen Seren in diesem Pool basierte nicht auf dem Kriterium des m nnlichen Geschlechts und der Blutgruppe AB. Es wird erwogen, dies bei der Zusammenstellung eines neuen NSP zu ber cksichtigen. F r TP verglichen wir die Ergebnisse eines positiven Serums mit denen vonBei den reinen Formen der getesteten Seren wurde ein Prozone-Effekt festgestellt. Dies ist auf die hohe Konzentration von Anti-HLA-Ak zur ckzuf hren, weshalb bei der Verwendung dieser Serumart als TP Vorsicht geboten ist. Allerdings waren die Ergebnisse f r das polyspezifische positive Serum, das 1:10 verd nnt wurde, und den Pool positiver Seren, der 1/2 verd nnt wurde, vergleichbar. Wir entschieden uns f r die Verwendung eines Pools positiver Seren, da diese eine gr ere Bandbreite an HLA-Antigenspezifit ten abdecken.

Il trapianto di midollo osseo il trattamento d'elezione per diverse malattie maligne e non, come leucemia, aplasia midollare e immunodeficienza. In Tunisia si effettuano solo trapianti allogenici o allotrapianti tra un ricevente e un donatore HLA-identico. Tali donatori geno-identici si trovano nei fratelli di pazienti candidati al trapianto di BM. I donatori vengono innanzitutto selezionati mediante screening sierologico per la classe di istocompatibilit I (HLA-A e B). Segue la PCR-SSP o la PCR-SSO per la tipizzazione HLA di classe II per il ricevente e per qualsiasi donatore compatibile. Poich tutti i kit di tipizzazione HLA che utilizziamo hanno una bassa risoluzione, stato sviluppato un approccio di screening con microsatelliti; la tipizzazione HLA completata dalla genotipizzazione di un pannello di 4 microsatelliti che coprono l'intera regione HLA. Studiando la segregazione degli aplotipi utilizzando questo pannello nei vari membri della famiglia di un candidato al trapianto di OM, siamo stati in grado di identificare ricombinazioni genetiche o CO nella regione HLA.

Die Knochenmarktransplantation ist die Behandlung der Wahl bei mehreren malignen und nicht malignen Erkrankungen wie Leuk mie, Knochenmark-Aplasie und Immundefekten. In Tunesien wird nur die allogene Transplantation oder Allotransplantation zwischen einem Empf nger und einem HLA-geno-identischen Spender durchgef hrt. Solche genoidentischen Spender werden unter den Geschwistern der Patienten gefunden, die f r eine MO-Transplantation in Frage kommen. Die Auswahl der Spender erfolgt zun chst durch eine erste Sortierung nach dem Kriterium der Histokompatibilit t Klasse I (HLA-A und B) mittels Serologie. Anschlie end wird die PCR-SSP oder PCR-SSO f r die HLA-Klasse-II-Typisierung f r den Empf nger und seinen eventuell kompatiblen Spender erg nzt. Da alle von uns verwendeten HLA-Typisierungskits eine geringe Aufl sung haben, wurde ein Mikrosatelliten-Screening-Ansatz entwickelt, bei dem die HLA-Typisierung durch die Genotypisierung eines Panels von 4 Mikrosatelliten, die die gesamte HLA-Region abdecken, erg nzt wird. Die Untersuchung der Haplotypensegregation mit Hilfe dieses Panels bei den verschiedenen Familienmitgliedern eines Kandidaten f r eine MO-Transplantation erm glichte es uns, genetische oder CO-Rekombinationen in der HLA-Region nachzuweisen.

Bone marrow transplants are the treatment of choice for many malignant and non-malignant diseases, such as leukemia, bone marrow aplasia and immune deficiency. In Tunisia, only allogeneic or allograft transplants are performed between a recipient and an HLA-identical donor. Such geno-identical donors are found in the siblings of patients who are candidates for BM transplants. Donors are first selected on the basis of histocompatibility class I (HLA-A and B) by serology. This is followed by PCR-SSP or PCR-SSO for HLA class II typing of the recipient and any compatible donor. Given that all the HLA typing kits we use are of low resolution, a microsatellite screening approach has been developed. HLA typing is completed by genotyping a panel of 4 microsatellites covering the entire HLA region. The study of haplotype segregation using this panel in the various family members of a candidate for OM transplantation enabled us to highlight genetic or CO recombinations in the HLA region.

Os transplantes de medula ssea s o o tratamento de elei o para uma s rie de doen as malignas e n o malignas, como a leucemia, a aplasia medular e a imunodefici ncia. Na Tun sia, apenas s o efectuados transplantes alog nicos ou de aloenxerto entre um recetor e um dador HLA-id ntico. Estes dadores geno-id nticos encontram-se nos irm os de doentes que s o candidatos a transplantes de BM. Os dadores s o primeiro seleccionados atrav s de um rastreio serol gico da histocompatibilidade de classe I (HLA-A e B). Segue-se a PCR-SSP ou PCR-SSO para a tipagem HLA de classe II do recetor e de qualquer dador compat vel. Dado que todos os kits de tipagem HLA que utilizamos t m uma resolu o baixa, foi desenvolvida uma abordagem de rastreio por microssat lites. A tipagem HLA completada pela genotipagem de um painel de 4 microssat lites que cobrem toda a regi o HLA. Ao estudar a segrega o de hapl tipos utilizando este painel nos v rios membros da fam lia de um candidato a transplante de OM, conseguimos identificar recombina es gen ticas ou de CO na regi o HLA.