Sarfraz Kiani

Bawelna jest ważną rośliną uprawną. W ciągu ostatnich kilku lat pojawila się endemiczna choroba zwana CLCuD (Cotton Leaf Curl Disease). Stanowi ona ogromną przeszkodę w uzyskaniu wysokich plon w bawelny. Choroba ta jest wywolywana przez grupę begomowirus w, a mianowicie Cotton Leaf Curl Disease (CLCuD). Aby rozwiązac ten problem, wypr bowano kilka metod hodowlanych i transgenicznych. Spośr d nich bardziej obiecująca okazala się interferencja RNA (RNAi). Zastosowanie interferencji RNA jest korzystne, ponieważ technika ta jest przyjazna dla środowiska. W obecnych badaniach konstrukcja genetyczna oparta na RNAi zostala przeksztalcona w dw ch elitarnych odmianach bawelny MNH-786 i VH-289 w celu zwiększenia odporności wirusowej na CLCuD. Przeksztalcenie konstrukcji w roślinach przeprowadzono metodą szczytową pędu za pośrednictwem Agrobacterium. Pomyślną transformację i integrację konstrukcji RNAi opartej na amplikonie potwierdzono za pomocą PCR w pokoleniu T1 i T2 przy użyciu specyficznych dla genu starter w. Zdolnośc konstrukcji C2 do zwalczania wirusa potwierdzono za pomocą PCR w czasie rzeczywistym z mianem CLCuD. Por wnanie wskaźnika choroby wirusowej i miana wirusa potwierdzilo, że rośliny wykazujące pozytywną integrację genu RNAi z minimalnymi objawami mialy r wnież niskie miano wirusa.

Il cotone una coltura importante. Negli ultimi anni, la malattia del ricciolo fogliare del cotone (CLCuD) diventata endemica. Ci ha ostacolato enormemente la produzione di cotone ad alto rendimento. Questa malattia causata da un gruppo di begomovirus denominato Cotton Leaf Curl Disease (CLCuD). Sono stati tentati diversi approcci di selezione e transgenici per superare il problema. Tra questi, l'interferenza dell'RNA (RNAi) si dimostrata la pi promettente. L'uso dell'interferenza dell'RNA vantaggioso in quanto la tecnica rispettosa dell'ambiente. Nell'attuale lavoro di ricerca, il costrutto genico basato sull'RNAi stato trasformato in due variet di cotone d' lite, MNH-786 e VH-289, per migliorare la resistenza virale contro la CLCuD. La trasformazione del costrutto nelle piante stata effettuata con il metodo dell'apice del germoglio mediato da Agrobacterium. La trasformazione e l'integrazione riuscite del costrutto RNAi basato sull'amplicone sono state confermate tramite PCR nella generazione T1 e T2 utilizzando primer specifici per il gene. La capacit di abbattimento del costrutto C2 stata confermata tramite PCR in tempo reale del titolo CLCuD. Il confronto tra l'indice di malattia virale e il titolo virale ha assicurato che le piante che mostravano un'integrazione positiva del gene RNAi con sintomi minimi avevano anche un titolo virale basso.

Le coton est une culture importante. Au cours des derni res ann es, la maladie du frisol e du coton (CLCuD) est devenue end mique. Elle a consid rablement entrav la production de rendements lev s de coton. Cette maladie est caus e par un groupe de b gomovirus appel Cotton Leaf Curl Disease (CLCuD). Plusieurs approches de s lection et de transg n se ont t essay es pour surmonter ce probl me. Parmi celles-ci, l'interf rence ARN (RNAi) s'est av r e la plus prometteuse. L'utilisation de l'interf rence ARN est favorable car cette technique est respectueuse de l'environnement. Dans le cadre des travaux de recherche actuels, une construction g n tique bas e sur l'RNAi a t transform e dans deux vari t s de coton d' lite, MNH-786 et VH-289, afin d'am liorer la r sistance virale contre la CLCuD. La transformation de la construction dans les plantes a t r alis e par la m thode de l'apex de pousse m di e par Agrobacterium. La transformation et l'int gration r ussies de la construction ARNi bas e sur l'amplicon ont t confirm es par PCR dans les g n rations T1 et T2 l'aide d'amorces sp cifiques au g ne. La capacit de neutralisation de la construction C2 a t confirm e par PCR en temps r el du titre CLCuD. La comparaison de l'indice de maladie virale et du titre viral a permis de confirmer que les plantes pr sentant une int gration positive du g ne ARNi avec un minimum de sympt mes avaient galement un titre viral faible.

Baumwolle ist eine wichtige Kulturpflanze. In den letzten Jahren hat sich die Baumwollblattrollkrankheit (CLCuD) zu einer endemischen Krankheit entwickelt. Sie hat die Produktion hoher Baumwollertr ge erheblich beeintr chtigt. Diese Krankheit wird durch eine Gruppe von Begomoviren verursacht, n mlich die Baumwollblattrollkrankheit (CLCuD). Es wurden verschiedene Z chtungs- und transgene Ans tze versucht, um das Problem zu l sen. Unter diesen erwies sich die RNA-Interferenz (RNAi) als vielversprechend. Der Einsatz von RNA-Interferenz ist vorteilhaft, da die Technik umweltfreundlich ist. In der aktuellen Forschungsarbeit wurde ein RNAi-basiertes Genkonstrukt in zwei Elite-Baumwollsorten, MNH-786 und VH-289, transformiert, um die Virusresistenz gegen CLCuD zu verbessern. Die Transformation des Konstrukts in Pflanzen erfolgte durch die Agrobacterium-vermittelte Sprossapex-Methode. Die erfolgreiche Transformation und Integration des amplikonbasierten RNAi-Konstrukts wurde durch PCR in der T1- und T2-Generation unter Verwendung genspezifischer Primer best tigt. Die Knockdown-F higkeit des C2-Konstrukts wurde durch Echtzeit-CLCuD-Titer-PCR best tigt. Der Vergleich des Virus-Krankheitsindex und des Virustiters best tigte, dass die Pflanzen, die eine positive RNAi-Genintegration mit minimalen Symptomen aufwiesen, auch einen niedrigen Virustiter hatten.

O algod o uma cultura importante. Nos ltimos anos, a doen a do enrolamento das folhas do algod o (CLCuD) surgiu como uma endemia. Ela tem causado um grande obst culo na produ o de altos rendimentos de algod o. Esta doen a causada por um grupo de begomov rus, chamado doen a do enrolamento das folhas do algod o (CLCuD). V rias abordagens de melhoramento gen tico e transg nicas foram tentadas para superar o problema. Entre elas, a interfer ncia de RNA (RNAi) provou ser mais promissora. O uso da interfer ncia de RNA favor vel, pois a t cnica amiga do ambiente. No trabalho de pesquisa atual, a constru o gen tica baseada em RNAi foi transformada em duas variedades de algod o de elite, MNH-786 e VH-289, para aumentar a resist ncia viral contra a CLCuD. A transforma o da constru o nas plantas foi feita pelo m todo de pice do rebento mediado por Agrobacterium. A transforma o e integra o bem-sucedidas da constru o de RNAi baseada em amplicon foram confirmadas por PCR nas gera es T1 e T2, utilizando primers espec ficos para o gene. A capacidade de supress o da constru o C2 foi confirmada por PCR em tempo real do t tulo de CLCuD. A compara o do ndice de doen a viral e do t tulo viral garantiu que as plantas que apresentavam integra o positiva do gene RNAi com sintomas m nimos tamb m tinham um t tulo viral baixo.